Склероз

ПЦР (полимеразная цепная реакция) в урологии

Что такое полимеразная цепная реакция

Основа анализа — амплификация (удвоение) – создание множества копий из короткого участка ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты), представляющей генетический комплекс человека. Для исследования нужно очень малое количество физиологического вещества (мокрота, каловые массы, соскоб эпителия, сок простаты, кровь, сперма, околоплодные воды, слизь, ткань плаценты, моча, слюна, жидкость плевральная, цереброспинальная). При этом, например, в мочеполовом тракте больного возможно обнаружение даже единичного вредоносного микроба.

Методику ПЦР (полимеразной цепной реакции) разработал американский ученый К. Мюллисом, в 1993 получивший Нобелевскую премию.

Активно используется:

  • в раннем диагностировании инфекций, генетических, онкологических патологий;
  • в судебно-медицинской экспертизе при наличии для исследования крайне малого количества ДНК;
  • в ветеринарной медицине, фармацевтике, биологии, молекулярной генетике;
  • для идентификации личности по ДНК, подтверждения отцовства;
  • в палеонтологии, антропологии, экологии (при отслеживании качества продуктов, факторов внешней среды).

Виды диагностики

Стандартный метод

Анализ полимеразно-цепной реакции проводится на основе многократной амплификации (удвоения) конкретного фрагмента ДНК и РНК при использовании особых ферментов-праймеров. В результате цепочки копирования получается количество материала, достаточное для исследования.

ПЦР мочи имеет множество преимуществ

В ходе процедуры копируется только искомый фрагмент (соответствующий заданным конкретным условиям) и в случае, если он действительно присутствует в пробе.

Другие методы

  • ПЦР , проводимая в режиме реального времени. В этом виде исследования процесс выявления заданного фрагмента ДНК запускается после прохождения каждого цикла, а не после осуществления всей цепочки 30 – 40 циклов. Этот вид исследования позволяет получить информацию о количестве патогена (вируса или микроба) в организме, то есть осуществлять количественный анализ.
  • ОТ-ПЦР (режим обратной транскрипции). Этот анализ используют, чтобы найти РНК с одной цепочкой для обнаружения вирусов, генетической базой которых является именно РНК (например, вирус гепатита С, иммунодефицита). При таком исследовании используется особый фермент — обратная транскриптаза и определенный праймер и на базе РНК строится одноцепочная ДНК. Затем из этой цепочки восстанавливают вторую цепь ДНК и выполняется стандартная процедура.

Виды диагностики

ПЦР — метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).

Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.

Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов.

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.

Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.).

В урологической и гинекологической практике —

  • для выявления хламидиоза,
  • уреаплазмоза,
  • гонореи,
  • герпеса,
  • гарднереллёза,
  • микоплазменной инфекции,
  • ВПЧ — вирусов папилломы человека;

В пульмонологии —

  • для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний,
  • туберкулёза;

В гастроэнтерологии —

  • для выявления хеликобактериоза;

В клинике инфекционных заболеваний —

  • в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза,
  • дифтерии,
  • вирусных гепатитов В, С и G;

В гематологии —

  • для выявления цитомегаловирусной инфекции,
  • онковирусов.

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции.

При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу.

Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь.

При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева.

Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала.

Кровь сдается натощак утром.

Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер.

Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Другие методы

Подготовка к анализу включает в себя:

  • Полный отказ от употребления антисептиков и антибактериальных средств, не меньше, чем за две недели перед анализом;
  • Исключите прием алкогольных напитков и половые контакты за три дня до обследования;
  • За 2 — 3 часа до процедуры необходимо воздержаться от мочеиспускания;
  • Сдавать биологический материал лучше натощак;
  • Избегайте любых физических нагрузок.

Сдавая ПЦР-анализ в нашей лаборатории, Вы получите результат высокой точности в назначенный срок. ПЦР-диагностика позволит получить наиболее реальное положение дел в плане здоровья. Именно это позволяет нашим врачам-урологам точно ставить диагноз и верно проводить лечение многих недугов.

ПЦР диагностика в урологии применяется для:

  • Диагностирования бактериальных инфекций: гонококка, трихомонады, микоплазмы, хламидии, гарднереллы, уреаплазмы;
  • Определения вирусных инфекций: генитального герпеса, ВИЧ, ВПЧ, вирусного гепатита;
  • Выявления индивидуальной непереносимости определенных лекарств;
  • Установления отцовства.

ПЦР диагностика в урологии имеет ряд преимуществ по сравнению с традиционными методами:

  • Высокая специфичность — возбудитель выявляется на основании уникального только для него фрагмента ДНК;
  • Высокая чувствительность — полимеразная реакция верифицирует инфекцию, даже если в исследуемом материале всего один возбудитель;
  • Материалом для исследования может служить биологический субстрат (моча, кровь, выделения из половых органов, сперма и т. д.);
  • Автоматизированный процесс прохождения диагностики;
  • В одном биологическом материале можно выявить сразу несколько инфекций;
  • Высокоскоростное проведение анализа;
  • Выявление количественных показателей возбудителя.

В сети наших урологических клиник Вы можете сдать ПЦР-анализ и другие урологические исследования быстро, анонимно, по приемлемым ценам, в обстановке доброжелательности и комфорта.

Взятие мазка из уретры 250 руб.
Мазок отпечаток 700 руб.
Пальцевое ректальное исследование 300 руб.
Взятие мазков для ПЦР-анализа 250 руб.
Взятие бак.посева 250 руб.
Исследование мазка из уретры (микроскопия) 450 руб.
Исследование секрета предстательной железы 700 руб.
Спермограмма 1500 руб.
Папавериновый тест 450 руб.
Программа обследования по бесплодию 12010 руб.
УЗИ органов мошонки 990 руб.
УЗИ предстательной железы 1200 руб.
УЗИ почек 990 руб.
УЗИ почек УЗИ мочевого пузыря 1500 руб.
УЗИ почек надпочечники мочеточники 1200 руб.
Допплеровское исследование сосудов малого таза для мужчины 1700 руб.

Звоните нам прямо сейчас и получайте всю необходимую информацию о диагностике и анализах в урологии.

Подготовка к процедуре (сдача биологических веществ на анализ)

В качестве образца для анализа ПЦР, при котором выявляют ДНК чужеродного патогена, служит любая биологическая жидкость, ткань, выделения организма. Забор исследуемого вещества проводят в виде взятия крови из вены, соскоба из гортани, полости носа, мочеиспускательного канала, плевральной полости, шейки матки.

Перед диагностической процедурой врач объясняет пациенту, забор какого материала будет взят:

  1. При обследовании на половые инфекции, производится забор выделений из половых органов, моча, мазок из уретры.
  2. При анализе на герпетические инфекции, цитомегаловирус, мононуклеоз – берут на анализ мочу, мазок из зева, на гепатит, токсоплазмоз — кровь из вены.
  3. С целью диагностирования различных видов поражений нервной системы проводится забор спинномозговой жидкости.
  4. В пульмонологии образцы для анализа — мокрота и жидкость плевральная.
  5. Когда проводят исследование возможных внутриутробных инфекций при вынашивании плода для анализа используют околоплодные воды и клетки плаценты.

Достоверность и точность анализа зависит от стерильности условий при взятии материала. Поскольку исследование ПЦР обладает высокой чувствительностью, любое загрязнение исследуемого вещества способно искажать результат.

Грамотная подготовка к сдаче биоматериала не представляет для пациентов никаких трудностей. Имеются определенные рекомендации:

  • при анализе на половые инфекции:
    • исключить интимные контакты за 72 часа до сдачи материала;
    • прекратить использование любых вагинальных средств за 3 суток;
    • с вечера предыдущего дня не проводить гигиену исследуемой области;
    • исключить мочеиспускание за 3 – 4 часа при взятии пробы из уретры;
  • прекратить прием антибиотиков за месяц до сдачи анализов на инфекции;
  • кровь сдают утром до принятия еды и питья;
  • сбор первой утренней порции мочи проводится в стерильный контейнер после тщательного интимного туалета.

О том, как проводится диагностика по методике полимеразной цепной реакции, читайте ниже.

Как проходит процедура

Поскольку ПЦР — высокоэффективный способ диагностики, дающий почти 100% результат, процедуру используют:

  • для подтверждения или исключения окончательного диагноза;
  • быстрой оценки эффективности проводимой терапии.

Во многих случаях ПЦР — единственно возможный тест для обнаружения развивающегося заболевания, если прочие бактериологические, иммунологические и вирусологические методики диагностирования оказываются бесполезными.

  • Вирусы обнаруживаются с помощью процедуры ПЦР сразу после инфицирования и до появления признаков болезни. Раннее выявление вируса позволяет оперативно назначить лечение.
  • Так называемая «вирусная нагрузка» (или — количество вирусов в организме) также определяется при анализе ДНК количественным методом.
  • Конкретные болезнетворные организмы (например, туберкулезную палочку Коха) сложно и слишком долго культивировать. Анализ ПЦР позволяет быстро выявить минимальное количество патогенов (живых и мертвых) в образцах, удобных для исследования.

Подробный анализ ДНК патогена используется:

  • чтобы определить его чувствительность к конкретным видам антибиотиков, что позволяет немедленно приступить к лечению;
  • чтобы контролировать распространение эпидемий среди домашних, диких животных;
  • чтобы выявить и отслеживать новые заразные виды микробов и подтипы патогенов, которые спровоцировали предыдущие эпидемии.

При выполнении исследования ПЦР раз за разом в реакторе (амплификаторе или термоциклере) повторяются определенные циклы:

  1. Первый шаг – денатурация. Слюну, кровь, биоптат, гинекологические пробы, мокроту, в которых подозревается присутствие ДНК (или РНК) патогена, помещают в амплификатор, где происходит нагревание материала и расщепление ДНК на две отдельные цепочки.
  2. Второй шаг – отжиг или небольшое охлаждение материала и добавление к нему праймеров, способных распознавать нужные участки в молекуле ДНК и связываться с ними.
  3. Третий шаг – элонгация – происходит после присоединения 2 праймеров к каждой из цепочек ДНК. В ходе процесса фрагмент ДНК патогена достраивается, и формируется его копия.

Эти циклы повторяются по типу «цепной реакции», каждый раз приводя к удвоению копий специфичного фрагмента ДНК (например, отрезка, где запрограммирован определенный вирус). За несколько часов образуется множество копий фрагмента ДНК, и выявляется их присутствие в образце.

Про расшифровку результатов и вывод исходя из ПЦР-реакции читайте ниже.

Противопоказания для проведения

Процедура ПЦР применяется в клинике инфекционных болезней, неонатологии, акушерстве, педиатрии, урологии, гинекологии, венерологии, неврологии, нефрологии, офтальмологии.

Показания для назначения анализа:

  • выяснение риска развития генетических отклонений у ребенка при вероятности наследственных патологий;
  • диагностирование обоих родителей при планировании беременности или тяжелом состоянии матери при протекающей беременности;
  • трудности с зачатием, выявление причин бесплодия;
  • подозрение на половые инфекции в острой стадии и при симптоматике перехода их в хроническую;
  • обнаружение причин воспалительных процессов неясного происхождения;
  • незащищенные случайные и постоянные половые контакты;
  • определение чувствительности патогенного микроорганизма к конкретным антибиотикам;
  • пациентам с подозрением на скрытую инфекцию для обнаружения патогенов до развития явной симптоматики (доклиническое диагностирование);
  • больным для подтверждения выздоровления после болезни (ретроспективная диагностика);:

Также используется диагностика при необходимости точного выявления следующих возбудителей::

  • вирусы гепатита (A B C G), иммунодефицита человека, цитомегаловирус;
  • вибрион холерный;
  • вирус простого герпеса, герпетиформные виды;
  • ретро – адено – и риновирусы;
  • вирусы краснухи, Эпштейна-Барр, варицелла (Зостер – вирус);
  • парво – и пикорновирусы;
  • вирус папилломы;
  • онкогенные вирусы;
  • бактерия Helicobacter pylori;
  • легионеллы, патогенные типы палочки кишечной;
  • стафилококк золотистый;
  • возбудитель менингита;
  • клостридии, дифтерийная и гемофильная палочка;

Используется и для определения инфекций:

  • инфекционный мононуклеоз;
  • боррелиоз, листериоз, клещевой энцефалит;
  • кандидоз, вызываемый грибками Candida;
  • половые инфекции – трихомониаз, уреаплазмоз, бледная трепонема, гарднереллез, гонорея, микоплазмоз, хламидиоз;
  • туберкулез.

Поскольку процедура проводится не с пациентом, без какого-либо воздействия на организм, а с биологическим материалом, взятым для исследования, то никаких противопоказаний для ПЦР не имеется по причине отсутствия потенциальной опасности.

Однако забор биоматериала из шеечного канала матки не проводят после процедуры кольпоскопии. Сдача мазков, соскобов на анализ разрешена только через 4 – 6 дней после окончания менструации и полного прекращения выделений.

Средняя стоимость

Цены на проведение полимеразной цепной реакции определяют: вид исследования, сложность идентификации возбудителя, трудность забора биологического материала, вид анализа (качественный или количественный), уровень цен в лаборатории.

С другой стороны, при исследовании ПЦР можно определить сразу несколько патогенов при заборе одного вида материала для анализа. Это позволяет сэкономить на других лабораторных анализах.

Ориентировочно, стоимость анализа ПЦР в рублях:

  • гонококк, гарднерелла, трихомонада вагиналис – от 180
  • хламидия трахоматис – от 190
  • папилломавирус – от 380 до 500
  • биоценоз урогенитального тракта у женщин (количественная и качественная оценка микрофлоры) – от 800.
Adblock
detector