Склероз

Изменения ликвора при менингитах || Цитоз в ликворе что это такое

2.4.2. Микроскопическое исследование ликвора

Макроскопическое
исследование – это вся информация о
биоматериале, которую лаборант может
получить при помощи органов чувств.

  1. Цвет
    – в норме спинномозговая жидкость
    бесцветна и по виду не отличается от
    воды. Цвет ее определяют, сравнивая
    пробирку с материалом с такой же
    пробиркой, заполненной водой на белом
    фоне. Он может изменять при различных
    патологических процессах:

  • красный
    – примесь неизмененных эритроцитов
    (эритроцитархия). Определить ее можно
    при помощи тест-полосок (ГемоФАН),
    которые имеют 2 шкалы сравнения: одна
    из них меняет цвет при наличии интактных
    эритроцитов, другая – при наличии
    свободного гемоглобина в ликворе;

  • ксантохромный
    (желтый, желто-коричневый, розовый,
    коричневый) окрас возникает в присутствии
    оксигемоглобина, метгемоглобина и
    билирубина;

  • розовый
    цвет ликвору придает оксигемоглобин,
    освободившийся из лизированных
    эритроцитов;

  • желтый
    цвет обусловлен высоким содержанием
    билирубина, который образуется из
    гемоглобина. Для определения
    билирубинархии и ее выраженности
    используют тест-полоски (ИктоФАН), их
    реагентная зона меняет цвет от
    бледно-розового до насыщенного розового
    в зависимости от концентрации билирубина;

  • коричневый
    цвет ликвору придают метгемоглобин и
    метальбумин, они появляются при наличии
    инкапсулированных гематом и геморрагий
    в ЦНС;

  • зеленая
    окраска возникает при выраженной
    билирубинархии, так как происходит
    переход билирубина в биливердин –
    пигмент оливкового цвета. Иногда она
    обусловлена примесью гноя.

  • Прозрачность
    – в норме спинномозговая жидкость
    прозрачная, определяют этот параметр,
    сравнивая полученный материал с
    дистиллированной водой. Легкое помутнение
    ликвора наблюдается при лейкоцитозе
    свыше 200х106/л,
    содержания эритроцитов более 400х106/л,
    общего белка – более 3 г/л. Если после
    центрифугирования спинномозговая
    жидкость становится прозрачной, то
    мутность ее обусловлена форменными
    элементами, если остается мутной –
    микроорганизмами. Опалесценция ликвора
    возникает при высокой концентрации
    фибриногена.

  • Фибринозная
    пленка – в норме в спинномозговой
    жидкости низкое содержание фибрина и
    пленка при отстаивании не образуется.
    Высокое содержание фибрина дает нежную
    сеточку или пленку на стенках пробирки,
    мешочек или желеобразный сгусток.
    Ликвор, содержащий большое количество
    грубодисперсных белков сразу после
    выпускания свертывается в виде
    желеобразного сгустка.

    2.4.2. Микроскопическое исследование ликвора

    Это
    один из самых ответственных этапов
    исследования спинномозговой жидкости,
    на основании данных которого нередко
    подтверждаются либо опровергаются
    диагнозы.

    Подсчет
    количества форменных элементов проводится
    в течении 30 минут после извлечения
    спинномозговой жидкости с последующей
    дифференциацией клеток. Для подсчета
    лейкоцитов
    препарат окрашивают одним из реактивов:

    • 5
      мл 10% раствор ледяной уксусной кислоты
      0,1 метилового фиолетового вода до 50
      мл – время окрашивания 2 минуты;

    • Реактив
      Самсона: 2,5 мл спиртового раствора
      фуксина 1:10 30 мл уксусной кислоты 2 г
      карболовой кислоты дистиллированной
      воды до 100 мл, время окрашивания 10-15
      минут.

    Окрашенный
    препарат помещают в камеру Фукса-Розенталя
    объемом 3,2 мкл. Лейкоциты считают на
    малом увеличении во всех 256 квадратах,
    при высоком плеоцитозе 200-1000х106
    считают половину сетки и результат
    умножают на 2, при плеоцитозе свыше
    1000х106
    подсчитывают один ряд больших квадратов
    и результат умножают на 4. Нормальные
    значения цитоза указаны в таблице 1, при
    различных видах патологии – в таблице
    2.

    Таблица
    1

    Цитоз
    в люмбальном ликворе

    Возраст

    Кл/3
    мкл

    Кл
    в 1 мкл

    Кл
    х106/литр

    Менее
    1 года

    0-90

    0-30

    0-30

    1-4
    года

    0-60

    0-20

    0-20

    5
    лет – пубератный возраст

    0-30

    0-10

    0-10

    Взрослые

    0-15

    0-5

    0-5

    Таблица
    2

    Плеоцитоз
    при различных заболеваниях

    Заболевание

    Количество
    клеток ( х106/л)

    Гнойный
    менингит

    2000-5000

    Абсцесс
    мозга, актиномикоз

    1000-2000

    Острый
    туберкулезный менингит

    100-500

    Серозный
    менингит

    100-300

    Нейросифилис

    50-500

    Энцефалит

    30-300

    Ишемический
    инсульт

    10-200

    Опухоли
    ЦНС

    10-60

    Рассеянный
    склероз

    3-50

    Количество
    эритроцитов
    в ликворе подсчитывают в счетной камере
    Горяева. Для этого СМЖ с примесью крови
    разводят в 10 раз — 9 частей изотонического
    раствора хлорида натрия и 1 часть СМЖ
    смешивают в пробирке. Полученную жидкость
    тщательно перемешивают, заполняют
    счетную камеру Горяева и, согласно
    правилам подсчета количества эритроцитов
    крови, определяют число эритроцитов в
    пяти больших квадратах. Количество
    эритроцитов в 1 мкл СМЖ определяют по
    формуле:

    где
    А – количество эритроцитов в 5 больших
    (80 малых) квадратах, 1/400 – объем малого
    квадрата, 10 – разведение ликвора, 80 –
    количество малых квадратов.

    При
    подсчете в камере Фукса-Розенталя в
    окрашенных фуксином клеточных и форменных
    элементах просматриваются структуры
    ядра и цитоплазмы, что позволяет проводить
    их дифференцировку. Оценку их проводят
    при увеличении 7х40. Регистрация результатов
    подсчета может иметь процентное или
    численное выражение (ликворограмма).
    Учитывая, что форменные и клеточные
    элементы могут подвергаться дегенеративным
    изменениям, при долгом нахождении в
    СМЖ, необходимо проводить оценку и
    подсчет форменных и клеточных элементов
    в окрашенных препаратах.

    Клетки
    ликвора имеют совершенно другое сродство
    к красящим веществам, чем клетки крови,
    поэтому и подбор красителей должен быть
    иным. Хорошие результаты дают следующие
    виды окраски препаратов:

    1. Окраска
      по Розиной. СМЖ центрифугируют 7–10
      минут. Надосадочную жидкость сливают,
      осадок помещают на обезжиренное стекло,
      легким покачиванием распределяют его
      на поверхности стекла и через 1–2 минуты
      жидкость сливают. Стекло ставят в
      вертикальное положение и высушивают
      в сушильном шкафу при температуре 40–50
      °С, после чего фиксируют 1–2 минуты
      метанолом и красят по Романовскому:
      препараты окрашивают 6–12 мин, в
      зависимости от толщины мазка. Препарат
      промывают дистиллированной водой и
      высушивают. Если ядра имеют бледно
      голубой цвет, мазок докрашивают еще
      2–3 минуты.

    2. Окраска
      по Возной. Осадок, полученный при
      центрифугировании, выливают на стекло,
      слегка покачивая его, равномерно
      распределяют на поверхности. Высушивают
      при комнатной температуре в течение
      суток, фиксируют 5 минут метиловым
      спиртом. Затем окрашивают раствором
      азур эозина (таким же, как для окраски
      крови, но разведенным в 5 раз) в течение
      1 ч. Если клетки бледноокрашены,
      докрашивает неразведенной краской под
      контролем микроскопа от 2 до 10 минут.
      Чем больше форменных элементов в
      ликворе, особенно при наличии крови,
      тем продолжительнее окраска.

    3. Окраска
      по Алексееву. На высохший, но не
      фиксированный препарат наносят 6–10
      капель красителя Романовского–Гимзы,
      той же пипеткой осторожно распределяют
      её на весь препарат и оставляют на 30
      секунд. Затем добавляют, не сливая
      краски, 12–20 капель дистиллированной
      воды, предварительно нагретой до
      температуры 50–60 °С, в соотношении 1 :
      2. Покачиванием препарата перемешивают
      краску с водой и оставляют на 3 минуты.
      Смывают краску струёй дистиллированной
      воды, сушат препарат фильтровальной
      бумагой и микроскопируют. Метод пригоден
      для проведения срочного цитологического
      исследования.

    Нормальные
    значения содержания клеточных элементов
    в ликворе представлены в таблице 3.

    Таблица
    3

    Содержание
    форменных элементов в ликворе в норме
    у детей и взрослых

    Клетки

    Взрослые

    Новорожденные

    Лимфоциты

    40-80

    5-35

    Моноциты

    15-45

    50-90

    Нейтрофилы

    0-6

    0-8

    Эозинофилы

    Редко

    Редко

    Эпителий,
    эпиндимоциты

    Редко

    Редко

    Эритроциты

    Отсутствуют

    Отсутствуют

    Технология
    цитоцентрифугирования (цитоспин).
    Приготовление
    окрашенных препаратов ликвора из
    осадочной жидкости после центрифугирования
    не всегда позволяет получить тонкий
    слой клеток, пригодный для диагностики.
    Для решения этой проблемы была разработана
    технология цитоцентрифугирования,
    которая заключается в аппаратном
    изготовлении высококачественных
    препаратов. Для этого полученный ликвор
    подготавливают к исследованию и помещают
    в цитокамеру, после чего он дозированно
    подается на вертикально распложенные
    в роторе цитоцентрифуги слайды. Под
    действием центробежно силы клетки
    равномерно распределяются по стеклу,
    в то время как более легкая жидкость
    удаляется с поверхности препарата.
    Высушивание, фиксация и окраска препарата
    также проводятся в цитоцентрифуге.
    Аппарат позволяет создать до 8-ми
    диагностических зон на одном слайде.

    Атипичные
    клетки

    чаще
    являются клетками опухолей ЦНС или её
    оболочек. Так же могут встречаться при
    хроническом воспалительном процессе
    (туберкулезный менингит, менингоэнцефалит,
    рассеянный склероз, энцефаломиелит) –
    это клетки эпендимы желудочковпаутинной
    оболочки, а так же лимфоциты, моноциты
    и плазмоциты с изменениями ядра и
    цитоплазмы.

    Измененные
    клетки и тени клеток
    обнаруживаются
    при длительномих нахождении в СМЖ. Чаще
    всего подвергаются аутолизу нейтрофильные
    гранулоциты, клетки паутинной оболочки,
    эпендимы желудочков. Диагностического
    значения измененные клетки и тени клеток
    не имеют.

    Кристаллыв
    ликворе

    обнаруживаются редко. На 4–5 день после
    субарахноидального кровоизлияния,
    черепно-мозговой травмы обнаруживаются
    кристаллы гемосидерина, в случае распада
    опухоли в содержимом кисты можно
    обнаружить кристаллы гематоидина,
    холестерина, билирубина, так же кристаллы
    холестерина образуются в очагах жировой
    дистрофии, некроза ткани мозга и в кистах
    мозга. Для выявления кристаллов в СМЖ
    используют реакции, представленные в
    таблице 4.

    Таблица
    4

    Реакции,
    используемые для выявления кристаллов
    в ликворе

    Кристаллы

    Реакция

    Гематоидина

    В
    азотной кислоте дают исчезающее синее
    окрашивание

    Гемосидерина

    Выявляются
    реакцией на берлинскую лазурь, клетки
    окрашиваются в синий и голубой цвета

    Холестерина

    Растворяются
    в спирте, эфире, расплавляются в
    концентрированной серной кислоте с
    образованием конедансационных
    соединений красного цвета

    Билирубина

    Растворимы
    в хлороформе и щелочах

    Элементы
    эхинококка
    крючья,
    сколексы и обрывки хитиновой оболочки
    пузыря эхинококка могут быть выявлены
    при множественном эхинококкозе мозговых
    оболочек. Находят их чрезвычайно редко.

  • Adblock
    detector